產(chǎn)品簡稱：MOVAS-1

　　中文名稱：小鼠主動脈平滑肌細胞

　　細胞數(shù)量：1*10^6

　　組織來源：成年C57BL/6小鼠，心，主動脈，平滑肌

　　形態(tài)特征：紡錘形

　　生長方式：貼壁生長

　　背景描述：1999年12月用膠原酶-彈性蛋白酶消化法分離的原代血管平滑肌細胞，用SV40大T抗原和新霉素耐藥基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒進行了轉(zhuǎn)染。在0.4mg/mlG418存在下選擇克隆并通過限制稀釋進行亞克隆。

　　培養(yǎng)條件：DMEM高糖，10%胎牛血清，丙酮酸鈉；空氣95%，二氧化碳5%；37℃培養(yǎng)

　　換液頻：率2-3天

　　傳代比例：1:5-1:8

　　凍存液配方：95%完全培養(yǎng)基，5%DMSO

　　安全性：BSL-1

　　供應(yīng)限制：僅供科研

　　運輸方式：常溫運輸（T25培養(yǎng)瓶）

　　細胞培養(yǎng)方法:

　　1、小鼠主動脈平滑肌細胞規(guī)格細胞傳代:細胞密度達到80-90%時即可傳代

　?、贄壢ヅ囵B(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;

　?、诩尤?ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;

　?、?-2min后,顯微鏡下觀察細胞,若大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;若細胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;

　　④將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;

　?、萦眯迈r培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;

　?、迲腋〖毎苯与x心收集,細胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。

　　2、細胞復(fù)蘇:

　?、賹龃婀茉?7℃溫水中快速搖晃融化,時間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。

　?、谠?000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補加適量培養(yǎng)基。

　　3、細胞凍存:待細胞生長狀態(tài)良好時進行細胞凍存保種

　?、贄壢ヅ囵B(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)

　?、?-2min后,顯微鏡下觀察細胞,大部分細胞回縮且有少量細胞脫落,輕輕吹打下確認消化情況后加入完全培養(yǎng)基終止消化;

　　③將細胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細胞;

　?、軐龃婀芊湃氤绦蚪禍睾?放入-80℃冰箱,4小時后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲存。