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一、服務介紹
大量的研究表明線粒體與細胞凋亡密切相關，其中線粒體跨膜電位（MMP）的下降，被認為是細胞凋亡級聯(lián)反應過程中早發(fā)生的事件之一。它發(fā)生在細胞核凋亡特征（染色質(zhì)濃縮、DNA斷裂）出現(xiàn)之前,一旦線粒體跨膜電位崩潰，則細胞凋亡不可逆轉(zhuǎn)。
二、實驗原理
JC-1是一種碳氰化合物類陽離子熒光染料，可作為檢測線粒體跨膜電位指示劑。JC-1在細胞內(nèi)以聚合體和單體兩種不同的物理形式存在，分別處于不同的熒光發(fā)射峰。當JC-1 濃度低或膜電位水平低時，主要以單體形式存在，激發(fā)波長為527nm，呈綠色熒光；當JC-1濃度升高或線粒體膜電位水平較高時，形成聚合物，發(fā)出紅色的熒光，激發(fā)波長為590nm。當細胞發(fā)生凋亡時，線粒體跨膜電位被去極化，JC-1從線粒體內(nèi)釋放，紅光強度減弱，以單體的形式存在于胞質(zhì)內(nèi)發(fā)綠色熒光，根椐這一特征就可以檢測線粒體膜電位的變化。
三、實驗流程
1. 細胞培養(yǎng)；
2. 用適當?shù)姆椒ㄕT導細胞凋亡，同時設立陰性依照組合陽性對照組，收集細胞；
3. 用PBS洗滌細胞三次，收集不多于1×106的細胞；
4. 取100 μL 10×Incubation Buffer加900μL去離子水稀釋成1×Incubation Buffer，混勻并預熱至37℃；
5. 吸取500 μL 1×Incubation Buffer，加入1μL JC-1，渦旋混勻配成JC-1工作液；
6. 取500 μL JC-1工作液將細胞均勻懸浮，37℃，5% CO2的培養(yǎng)箱中孵育15~20min。
7. 室溫離心（2000rpm,5min）收集細胞，用1×Incubation Buffer洗兩次；
8. 吸取500 μL 10×Incubation Buffer重新懸浮細胞；
9. 流式細胞儀檢測，分析。
四、客戶提供
細胞株(凍存株或培養(yǎng)好的細胞)，相關藥品或MMP檢測試劑盒（可代購）
五、公司提供
實驗步驟、結果圖、數(shù)據(jù)結果和分析報告
實驗周期：1-2周，具體需要根據(jù)細胞生長情況及實驗內(nèi)容而定。
